制(zhi)藥企(qi)業(ye)的潔(jie)(jie)凈室往(wang)往(wang)需要對環境微(wei)生(sheng)物(wu)進行監(jian)測，以保證生(sheng)產環境的清潔(jie)(jie)，不造成藥品污染(ran)。企(qi)業(ye)制(zhi)藥潔(jie)(jie)凈室常見污染(ran)源如下(根據中國美(mei)國食(shi)品藥品監(jian)督管理局研(yan)究院在2018年全國制(zhi)藥微(wei)生(sheng)物(wu)檢驗與(yu)控制(zhi)技(ji)術培訓(xun)班上的講課ppt):

1、人。攜帶的(de)微生物主(zhu)要有：金葡、表葡、八(ba)疊球菌(jun)、不動桿菌(jun)、產堿桿菌(jun)、親脂(zhi)性(xing)酵母、皮膚(fu)真菌(jun)等。

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2、空氣。攜帶(dai)的微(wei)生物主要有：微(wei)球菌屬、芽孢桿(gan)菌屬、葡萄球菌屬、棒(bang)狀桿(gan)菌、曲霉(mei)、青霉(mei)。

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3、設(she)備、墻面(mian)、地面(mian)表(biao)面(mian)。存(cun)留的微生物主要有：假(jia)單胞菌、表(biao)葡、芽孢桿菌等。

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4、原材料及(ji)包裝材料。攜帶的微生物(wu)有(you)：乳(ru)桿菌(jun)、假(jia)單胞菌(jun)、芽孢桿菌(jun)、鏈球(qiu)菌(jun)、梭菌(jun)、霉菌(jun)（枝孢屬、青霉屬、曲霉屬）。

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5、水。水中的微生物主要有：假單(dan)胞(bao)菌(jun)、產堿桿菌(jun)、寡(gua)養單(dan)胞(bao)菌(jun)、洋蔥伯克霍(huo)爾德菌(jun)、皮(pi)氏(shi)(shi)伯克霍(huo)爾德菌(jun)、甲基桿菌(jun)屬(shu)、沙雷氏(shi)(shi)菌(jun)、黃桿菌(jun)等(deng)。

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? ? ? ? 許多企業為了鑒(jian)定(ding)菌(jun)種，常將大量資(zi)金(jin)用(yong)于微(wei)生(sheng)物全自動鑒(jian)定(ding)儀器和相關(guan)試(shi)劑(ji)的購買。其(qi)實(shi)，一些微(wei)生(sheng)物生(sheng)化鑒(jian)定(ding)試(shi)劑(ji)盒（無須(xu)軟(ruan)件(jian)和儀器）、鑒(jian)別培養基和PCR試(shi)劑(ji)盒即可完成常見菌(jun)種的鑒(jian)定(ding)工作。

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? ? ? ? 對于以上(shang)紅(hong)色(se)標出的(de)(de)菌種(zhong)或菌屬，已知均可(ke)用HiMedia生(sheng)產(chan)的(de)(de)生(sheng)化(hua)(hua)鑒定試(shi)劑(ji)盒去作鑒定。其生(sheng)化(hua)(hua)鑒定試(shi)劑(ji)盒包含(han)有(you)生(sheng)化(hua)(hua)鑒定卡(ka)及輔助試(shi)劑(ji)，每個(ge)生(sheng)化(hua)(hua)鑒定卡(ka)上(shang)有(you)12個(ge)孔，預置相關的(de)(de)培養基和生(sheng)化(hua)(hua)試(shi)劑(ji)，對應(ying)12種(zhong)生(sheng)化(hua)(hua)反應(ying)。反應(ying)完成后，通過試(shi)劑(ji)盒內提供(gong)的(de)(de)結果(guo)詮釋表(biao)和菌種(zhong)標準表(biao)，即可(ke)人(ren)工完成菌種(zhong)鑒定。其試(shi)劑(ji)盒覆(fu)蓋大部(bu)分常見菌種(zhong)，準確(que)度高(gao)，在歐盟和美國FDA均有(you)產(chan)品注冊。

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? ? ? ? 上面(mian)的(de)(de)(de)常見菌(jun)(jun)群中，金葡(pu)、表葡(pu)可(ke)用葡(pu)萄(tao)球菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)生(sheng)化鑒(jian)定(ding)(ding)試劑盒（貨(huo)(huo)號(hao)KB004）進(jin)行鑒(jian)定(ding)(ding)，不動桿(gan)菌(jun)(jun)、芽孢桿(gan)菌(jun)(jun)、乳(ru)桿(gan)菌(jun)(jun)、鏈球菌(jun)(jun)均有相應的(de)(de)(de)生(sheng)化鑒(jian)定(ding)(ding)試劑盒。假(jia)單胞菌(jun)(jun)、洋蔥伯克(ke)霍(huo)爾(er)德菌(jun)(jun)可(ke)用非發(fa)酵菌(jun)(jun)生(sheng)化鑒(jian)定(ding)(ding)試劑盒（貨(huo)(huo)號(hao)KB019）進(jin)行鑒(jian)定(ding)(ding)。沙雷氏(shi)菌(jun)(jun)屬于腸桿(gan)菌(jun)(jun)科(ke)，可(ke)用腸桿(gan)菌(jun)(jun)科(ke)的(de)(de)(de)生(sheng)化鑒(jian)定(ding)(ding)試劑盒（貨(huo)(huo)號(hao)KB003）進(jin)行鑒(jian)定(ding)(ding)。

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? ? ? ? 對于(yu)黃色部分的菌(jun)種：寡養單(dan)胞(bao)菌(jun)，又稱嗜麥芽窄食單(dan)胞(bao)菌(jun)(Stenotrophomonas maltophilia)，舊名“嗜麥芽假單(dan)胞(bao)菌(jun)”。它(ta)和皮(pi)氏伯克霍爾(er)德菌(jun)、黃桿菌(jun)均(jun)可用非(fei)發酵菌(jun)試劑盒(he)進行鑒定。

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? ? ? ? 對于藍色部分的菌種：

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1、微(wei)球(qiu)菌(jun)屬。最常(chang)見(jian)為(wei)藤(teng)黃(huang)(huang)微(wei)球(qiu)菌(jun)（Micrococcus luteus）。其(qi)為(wei)革(ge)蘭(lan)氏陽性(xing)，與葡(pu)(pu)萄(tao)(tao)球(qiu)菌(jun)近(jin)似，菌(jun)落光(guang)滑，顏色(se)(se)呈(cheng)(cheng)黃(huang)(huang)或紅色(se)(se)。為(wei)條件致(zhi)病(bing)菌(jun)，廣泛存(cun)在于(yu)自然界。《伯杰氏細菌(jun)鑒定手冊》指(zhi)出，其(qi)接觸酶陽性(xing)，無運動性(xing)，可(ke)(ke)利用(yong)乙酸鹽、乳(ru)酸鹽和(he)丙酸鹽，不產生(sheng)(sheng)吲哚。依(yi)據生(sheng)(sheng)化(hua)特征鑒別藤(teng)黃(huang)(huang)微(wei)球(qiu)菌(jun)時(shi)，主(zhu)要依(yi)據其(qi)在含糖的(de)復雜培(pei)養(yang)(yang)基上好氧(yang)的(de)生(sheng)(sheng)長而(er)不產生(sheng)(sheng)可(ke)(ke)察(cha)覺(jue)的(de)酸。其(qi)菌(jun)落呈(cheng)(cheng)黃(huang)(huang)色(se)(se)、黃(huang)(huang)綠(lv)色(se)(se)或橙色(se)(se)。具體(ti)鑒定，可(ke)(ke)采用(yong)如下(xia)方(fang)案：1）先(xian)革(ge)蘭(lan)氏染(ran)色(se)(se)，觀察(cha)鏡(jing)下(xia)形態，如為(wei)球(qiu)形，革(ge)蘭(lan)陽性(xing)，且疑為(wei)葡(pu)(pu)萄(tao)(tao)球(qiu)菌(jun)或微(wei)球(qiu)菌(jun)。2）可(ke)(ke)采用(yong)“葡(pu)(pu)萄(tao)(tao)球(qiu)菌(jun)和(he)微(wei)球(qiu)菌(jun)發酵(jiao)培(pei)養(yang)(yang)基”（英文(wen)名Fermentation HiVeg Medium for Staphylococcus and Micrococcus，貨號#MV827），以區分(fen)微(wei)球(qiu)菌(jun)和(he)葡(pu)(pu)萄(tao)(tao)球(qiu)菌(jun)。其(qi)原理(li)是(shi)，培(pei)養(yang)(yang)基中(zhong)包含葡(pu)(pu)萄(tao)(tao)糖，葡(pu)(pu)萄(tao)(tao)球(qiu)菌(jun)能厭(yan)氧(yang)產酸，而(er)微(wei)球(qiu)菌(jun)不能。培(pei)養(yang)(yang)基含有的(de)溴甲酚紫為(wei)pH指(zhi)示劑，可(ke)(ke)指(zhi)示產酸帶(dai)來的(de)pH變化(hua)。該液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)(yang)基含有少量瓊脂，因而(er)創造出厭(yan)氧(yang)環境。培(pei)養(yang)(yang)18-24小時(shi)后，如果是(shi)藤(teng)黃(huang)(huang)微(wei)球(qiu)菌(jun)，則反應(ying)管(guan)沒有顏色(se)(se)變化(hua)，而(er)葡(pu)(pu)萄(tao)(tao)球(qiu)菌(jun)的(de)管(guan)變為(wei)金黃(huang)(huang)色(se)(se)。

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2、八疊球(qiu)菌屬：屬于消化(hua)球(qiu)菌科，細胞球(qiu)形，呈八個(ge)或更多細胞的立方堆(dui)狀。可(ke)形成芽(ya)孢，革蘭陽性。可(ke)發(fa)酵葡萄(tao)糖，產酸，專(zhuan)性厭氧，在pH1到9.8均可(ke)生長。無接觸酶。鏡(jing)下應不難辨認(ren)。

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? ? ? ? 對于產(chan)堿(jian)桿(gan)(gan)菌(jun)，它與產(chan)堿(jian)假單胞菌(jun)非(fei)常(chang)近(jin)似，它的鑒(jian)別(bie)特征是在含有(you)蛋白胨的肉湯培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)中產(chan)氨，使pH上升。糞產(chan)堿(jian)桿(gan)(gan)菌(jun)最常(chang)見(jian)，它在碳水(shui)化合物培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)上呈強烈的產(chan)堿(jian)反應。木糖(tang)氧(yang)化產(chan)堿(jian)桿(gan)(gan)菌(jun)使OF葡萄(tao)糖(tang)培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)和OF木糖(tang)培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)產(chan)酸(suan)(suan)。本菌(jun)能(neng)(neng)還原亞硝酸(suan)(suan)鹽，而不(bu)能(neng)(neng)還原硝酸(suan)(suan)鹽。因而，采用OF基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)礎培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)（英文名：OF Basal HiVegTM Medium，貨號MV395）和相(xiang)應的糖(tang)溶液可鑒(jian)別(bie)產(chan)堿(jian)桿(gan)(gan)菌(jun)。

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? ? ? ? 對于(yu)棒狀桿菌，它屬于(yu)革蘭氏陽性(xing)大(da)桿菌，接觸酶陽性(xing)。可采用(yong)碲酸鹽(yan)血瓊脂(zhi)平板進行分離培養，棒狀桿菌菌落呈(cheng)灰黑色。

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? ? ? ?對于甲基(ji)桿(gan)菌，可采用PCR 法擴增菌株的16S rDNA 和甲醇脫氫酶(mei)大亞基(ji)的 mxaF 基(ji)因，擴增產物(wu)進行(xing)測(ce)序，在NCBI數據庫中用BLAST 進行(xing)比對，并用MEGA4.0軟件進行(xing)系統(tong)進化樹分析。甲基(ji)桿(gan)菌為(wei)革蘭(lan)陰(yin)性(xing)，氧(yang)化酶(mei)和接(jie)觸酶(mei)陽性(xing)。

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? ? ? ? 對于(yu)梭(suo)菌，大(da)部分為嚴格厭氧菌。在《伯杰細菌鑒定(ding)手(shou)冊》中給出(chu)了一個(ge)表(biao)，主(zhu)要根(gen)據(ju)糖發(fa)酵來(lai)鑒定(ding)梭(suo)菌屬內的(de)各個(ge)菌種(zhong)(zhong)。HiMedia公(gong)司提供了一種(zhong)(zhong)包含35種(zhong)(zhong)糖發(fa)酵的(de)試劑盒（貨號KB009），因而(er)可用于(yu)梭(suo)菌的(de)鑒定(ding)。

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? ? ? ? 對于真菌(jun)(jun)(jun)，如親(qin)脂性酵母和霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)菌(jun)(jun)(jun)（枝孢(bao)屬(shu)(shu)、青霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)屬(shu)(shu)、曲霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)屬(shu)(shu)），首先從(cong)形(xing)態(tai)上可(ke)(ke)(ke)區(qu)分(fen)細菌(jun)(jun)(jun)，也可(ke)(ke)(ke)區(qu)分(fen)酵母和霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)菌(jun)(jun)(jun)，霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)菌(jun)(jun)(jun)常常有絲(si)(si)狀菌(jun)(jun)(jun)絲(si)(si)。不同霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)菌(jun)(jun)(jun)，有些從(cong)形(xing)態(tai)上也可(ke)(ke)(ke)區(qu)分(fen)。青霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)菌(jun)(jun)(jun)屬(shu)(shu)帚狀枝是根(gen)據(ju)(ju)青霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)菌(jun)(jun)(jun)屬(shu)(shu)特(te)征性結果，根(gen)據(ju)(ju)菌(jun)(jun)(jun)落特(te)征、分(fen)生(sheng)(sheng)(sheng)孢(bao)子(zi)梗、帚狀枝、瓶梗和分(fen)生(sheng)(sheng)(sheng)孢(bao)子(zi)形(xing)態(tai)特(te)征，就(jiu)可(ke)(ke)(ke)鑒定(ding)到屬(shu)(shu)甚至種水(shui)平(ping)。曲霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)具有有隔(ge)菌(jun)(jun)(jun)絲(si)(si)、分(fen)生(sheng)(sheng)(sheng)孢(bao)子(zi)梗和特(te)殊的(de)(de)分(fen)生(sheng)(sheng)(sheng)孢(bao)子(zi)頭結構，易與其他菌(jun)(jun)(jun)屬(shu)(shu)真菌(jun)(jun)(jun)區(qu)別(bie)。還可(ke)(ke)(ke)根(gen)據(ju)(ju)SDA或PDA平(ping)板上生(sheng)(sheng)(sheng)長的(de)(de)快慢、菌(jun)(jun)(jun)落形(xing)態(tai)、分(fen)生(sheng)(sheng)(sheng)孢(bao)子(zi)梗等(deng)進一(yi)步(bu)鑒別(bie)。HiMedia也提供了一(yi)款鑒別(bie)培養基，貨號(hao)M1127，可(ke)(ke)(ke)區(qu)分(fen)巴西曲霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)、黃曲霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)和寄(ji)生(sheng)(sheng)(sheng)曲霉(mei)(mei)(mei)(mei)(mei)。

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? ? ? ? 總(zong)之，對于制藥企業(ye)潔凈室的(de)(de)常(chang)見菌，通過形(xing)態染色(se)、生化鑒定（可采用市面上提供(gong)的(de)(de)生化鑒定試劑盒(he)）、PCR產物測序(xu)等手段，已足以滿足鑒定的(de)(de)需(xu)求，從而完(wan)成溯(su)源和診斷的(de)(de)任務。

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